Πώς να προετοιμάσετε το απόθεμα γλυκερόλης: 9 βήματα (με εικόνες)

Πίνακας περιεχομένων:

Πώς να προετοιμάσετε το απόθεμα γλυκερόλης: 9 βήματα (με εικόνες)
Πώς να προετοιμάσετε το απόθεμα γλυκερόλης: 9 βήματα (με εικόνες)

Βίντεο: Πώς να προετοιμάσετε το απόθεμα γλυκερόλης: 9 βήματα (με εικόνες)

Βίντεο: Πώς να προετοιμάσετε το απόθεμα γλυκερόλης: 9 βήματα (με εικόνες)
Βίντεο: 3 τρόποι για να δώσετε έμφαση όταν χτίζετε Link Building, Seo στρατηγικές, Site και περιεχόμενο 2024, Μάρτιος
Anonim

Το απόθεμα γλυκερόλης είναι ένας τύπος εναιωρήματος που χρησιμοποιείται σε εργαστηριακές ρυθμίσεις για την αποθήκευση βακτηριακών καλλιεργειών για παρατεταμένο χρονικό διάστημα. Όταν προστίθενται καλλιέργειες υγρών βακτηρίων σε διάλυμα γλυκερόλης 50%, η γλυκερόλη εγχέεται στα βακτηριακά κύτταρα, καθιστώντας τα δομικά σταθερά και επιτρέποντάς τους να αποθηκεύονται με ασφάλεια. Αφού αναμίξετε τα δείγματά σας, καταψύξτε τα στους −80 ° C (−112 ° F) για να διασφαλίσετε ότι θα παραμείνουν βιώσιμα για όσο το δυνατόν περισσότερο.

Βήματα

Μέρος 1 από 3: Ανάμιξη του διαλύματος γλυκερόλης

Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 1
Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 1

Βήμα 1. Προετοιμάστε μια υγρή καλλιέργεια των βακτηρίων που θέλετε να αποθηκεύσετε

Προκειμένου ένα απόθεμα γλυκερόλης να είναι αποτελεσματικό, πρέπει να συνδυαστεί με υγρή βακτηριακή καλλιέργεια. Η παραγωγή υγρής καλλιέργειας θα απαιτήσει από εσάς να επωάσετε ένα βακτηριακό δείγμα όλη τη νύχτα σε μια φιάλη Erlenmeyer γεμάτη με ζωμό λυσογένεσης και τη σωστή συγκέντρωση αντιβιοτικού.

  • Μόλις προετοιμάσετε μια υγρή καλλιέργεια, μπορείτε να βάλετε τα βακτήρια σε αποθήκευση ή να προχωρήσετε στην απομόνωση του πλασμιδικού DNA.
  • Ο ζωμός Lysogeny (επίσης γνωστός ως "ζωμός LB" και "υγρό LB") είναι ένας τύπος υγρού πλούσιου σε θρεπτικά συστατικά που χρησιμοποιείται για τη γρήγορη διάδοση βακτηρίων. Μπορεί να αγοραστεί από λιανοπωλητή που πωλεί εργαστηριακό εξοπλισμό και υλικά.
  • Η επώαση των βακτηριακών καλλιεργειών είναι μια εξαιρετικά τεχνική διαδικασία που περιλαμβάνει πολλές διαφορετικές μεταβλητές. Για το λόγο αυτό, είναι καλύτερο να εκτελείται από εκπαιδευμένο τεχνικό σε ελεγχόμενο εργαστηριακό περιβάλλον.
Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 2
Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 2

Βήμα 2. Αραιώστε καθαρή γλυκερόλη σε απεσταγμένο νερό για να δημιουργήσετε ένα διάλυμα γλυκερόλης 50%

Χρησιμοποιήστε μια αποστειρωμένη πιπέτα για να μετρήσετε 10 mL και των δύο υγρών και να τα συνδυάσετε σε μία φιάλη. Ανακατέψτε ή ανακινήστε καλά τη φιάλη μέχρι να αναμειχθούν ομοιόμορφα τα υγρά.

  • Η αραίωση της γλυκερίνης είναι απαραίτητη για να αποφευχθεί η βλάβη των βακτηριακών κυττάρων.
  • Μερικοί επιστήμονες προτιμούν να χρησιμοποιούν ένα διάλυμα γλυκερόλης τόσο χαμηλό όσο 15-40%, προκειμένου να αποφευχθεί η παραβίαση της βακτηριακής καλλιέργειας. Ωστόσο, ένα μείγμα 50% θα παρέχει τη μέγιστη διάρκεια ζωής στην αποθήκευση.
Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 3
Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 3

Βήμα 3. Μεταφέρετε 50 μικρολίτρα του διαλύματος γλυκερίνης 50% σε σωλήνα μικροφυγοκέντρησης

Μεταφέρετε την αραιωμένη γλυκερίνη στο νέο φιαλίδιο προσεκτικά για να αποφύγετε τη διαρροή. Θα χρησιμοποιήσετε αυτόν τον ίδιο περιέκτη για να εμποτίσετε το διάλυμα γλυκερόλης με την υγρή βακτηριακή καλλιέργεια και να τοποθετήσετε το δείγμα σε ψυκτική αποθήκη.

Εάν είναι δυνατόν, χρησιμοποιήστε έναν σωλήνα με βιδωτό επάνω μέρος και όχι έναν με επένδυση. Είναι γνωστό ότι οι σωλήνες με θραύση ανοίγουν τυχαία κατά τη διάρκεια της ανάμιξης και της παρατεταμένης αποθήκευσης

Μέρος 2 από 3: Προσθήκη της βακτηριακής καλλιέργειας

Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 4
Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 4

Βήμα 1. Προσθέστε 50 μικρολίτρα υγρής βακτηριακής καλλιέργειας στο διάλυμα

Χρησιμοποιήστε μια νέα πιπέτα για να μετρήσετε ίση ποσότητα υγρής καλλιέργειας και ρίξτε την απευθείας στο διάλυμα γλυκερόλης στο σωλήνα. Οι τελικές αναλογίες του αποθέματος γλυκερόλης σας πρέπει να είναι 50% βακτήρια και 50% αραιωμένη γλυκερόλη.

  • Η χρήση δυσανάλογων ποσοτήτων γλυκερόλης και υγρής καλλιέργειας θα μπορούσε να επηρεάσει τη σκληρότητα των βακτηρίων και να μειώσει τον χρόνο που μπορεί να επιβιώσει σε ψυκτική αποθήκευση.
  • Εάν χρησιμοποιείτε διάλυμα γλυκερόλης με χαμηλότερη συγκέντρωση, θα πρέπει να προσαρμόσετε ανάλογα την ποσότητα της βακτηριακής καλλιέργειας. Συμβουλευτείτε τη βιβλιογραφία σχετικά με το ακριβές στέλεχος που αποθηκεύετε για περισσότερες πληροφορίες.
Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 5
Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 5

Βήμα 2. Τοποθετήστε το καπάκι στο σωλήνα

Βιδώστε το καπάκι στη θέση του ή σπρώξτε προς τα κάτω μέχρι να ακούσετε ένα απαλό κλικ εάν χρησιμοποιείτε έναν σωλήνα από πάνω. Βεβαιωθείτε ότι το καπάκι είναι ασφαλές πριν προχωρήσετε.

Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 6
Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 6

Βήμα 3. Ανακινήστε απαλά τον σωλήνα για να αναμειχθεί η βακτηριακή καλλιέργεια και η γλυκερόλη

Χτυπήστε το σωλήνα μπρος -πίσω μερικές φορές μέχρι και τα δύο υγρά να κατανέμονται ομοιόμορφα. Σε αυτό το σημείο, τα βακτηριακά κύτταρα θα αρχίσουν σιγά-σιγά να απορροφούν το διάλυμα γλυκερόλης, το οποίο θα σταθεροποιηθεί και θα προστατεύσει την κυτταρική μεμβράνη από φθορά και βλάβες που σχετίζονται με τη θερμοκρασία.

Κρατήστε τον αντίχειρά σας σταθερά πιεσμένο στο καπάκι του σωλήνα μικροφυγοκέντρησης ενώ ανακινείτε για να βεβαιωθείτε ότι δεν χαλαρώνει

Μέρος 3 από 3: Αποθήκευση και αναβίωση βακτηριακών καλλιεργειών

Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 7
Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 7

Βήμα 1. Επισημάνετε το βακτηριακό δείγμα

Γράψτε το όνομα της καλλιέργειας σε μια μικρή ετικέτα δοκιμαστικού σωλήνα ή μια ταινία κάλυψης και κολλήστε την στον σωλήνα μικροφυγής, όπου θα είναι ορατή. Μπορείτε επίσης να σημειώσετε τις πληροφορίες ταξινόμησης των βακτηρίων απευθείας στο καπάκι χρησιμοποιώντας έναν δείκτη με τσόχα.

  • Φροντίστε επίσης να καταγράψετε τυχόν άλλες πληροφορίες που μπορεί να αποδειχθούν χρήσιμες κατά την ανάλυση, όπως το ακριβές στέλεχος του δείγματος ή η προέλευσή του.
  • Η επισήμανση των δοχείων των δειγμάτων σας είναι ένα απαραίτητο βήμα στη διαδικασία συλλογής, καθώς σας επιτρέπει να παρακολουθείτε το περιεχόμενό τους καθώς ανακατεύονται εντός και εκτός αποθήκευσης.
Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 8
Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 8

Βήμα 2. Καταψύξτε το δείγμα στους −80 ° C (−112 ° F)

Τοποθετήστε το επισημασμένο δείγμα σε υπερψυγμένο εργαστηριακό καταψύκτη σε σταθερή θερμοκρασία −80 ° C (−112 ° F). Όταν διατηρείται υπό αυτές τις συνθήκες, η βακτηριακή καλλιέργεια θα παραμείνει βιώσιμη για πολλά χρόνια.

Είναι κρίσιμο η θερμοκρασία του καταψύκτη να παραμένει σταθερή στους -80 ° C (−112 ° F). Εάν είναι πιο ζεστό, τα διατηρημένα βακτήρια μπορεί να πεθάνουν

Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 9
Προετοιμάστε το απόθεμα γλυκερόλης Βήμα 9

Βήμα 3. Ξύστε μια μικρή ποσότητα κατεψυγμένων βακτηρίων για να το προετοιμάσετε για ανάλυση

Όταν έρθει η ώρα να αναβιώσετε το δείγμα σας, αφαιρέστε τον σωλήνα μικροφυγοκέντρησης από την κατάψυξη και ανοίξτε το καπάκι. Χρησιμοποιήστε αποστειρωμένο βρόχο εμβολιασμού, οδοντογλυφίδα ή άκρη πιπέτας για να συλλέξετε μια μικρή ποσότητα κατεψυγμένου υλικού από την κορυφή του δείγματος και να βάλετε τα βακτήρια σε πλάκα άγαρ LB για εξέταση ή δοκιμή.

  • Προσέξτε να μην αφήσετε τα απόξεση των βακτηρίων να ξεπαγώσουν. Μπορεί να σας βοηθήσει να διατηρήσετε το σωλήνα αποθήκευσης σε ξηρό πάγο μέχρι να ολοκληρώσετε τις δοκιμές σας.
  • Τραβήξτε το δείγμα σας από τον καταψύκτη μόνο όταν είναι απολύτως απαραίτητο. Η επαναλαμβανόμενη απόψυξη και η κατάψυξη θα μειώσουν σημαντικά τη διάρκεια ζωής του.

Συνιστάται: